Ole faamama ole fluorescence ose vaega taua ile microscope fluorescence. O se faiga masani e tolu fa'amama fa'avae: o se fa'amama fa'aoso, se fa'amama fa'amama ma se fa'ata dichroic. E masani ona afifiina i totonu o se pusa ina ia faʻapipiʻi faʻatasi le vaega i totonu ole microscope.
E fa'afefea ona fa'aogaina se faamama fa'amalama?
Filifiliga Fiafia
O filiga fa'afiafia e fa'asalalauina le malamalama o se galu fa'apitoa ma poloka isi galu. E mafai ona fa'aogaina e gaosia ai lanu eseese e ala i le fa'alogoina o le faamama e fa'ataga ai na'o le tasi le lanu. O filiga fa'afiafia e sau i ituaiga autu e lua - filiga pasi umi ma filiga pasi fa'aili. O le exciter e masani lava o se faamama bandpass e pasi na'o le galu umi e mitiia e le fluorophore, ma fa'aitiitia ai le fa'aosoina o isi fa'apogai o le fluorescence ma poloka ai le malamalama fa'aoso i le fa'aulu fa'aulu. E pei ona faʻaalia e le laina lanumoana i le ata, BP o le 460-495, o lona uiga e naʻo le fluorescence o le 460-495nm e mafai ona pasia.
O lo'o tu'uina i totonu o le ala fa'amalamalamaga o se microscope fluorescence ma fa'amama uma ai galu uma o le fa'apogai o le malamalama se'i vagana le va'aiga fa'aoso o le fluorophore. O le fa'amama la'ititi o fa'asalalauga e fa'atonu ai le pupula ma le pupula o ata. Ole la'ititi ole 40% fa'asalalauga mo so'o se faamama fa'afiafia e fautuaina ina ia lelei le fa'asalalauga>85%. O le bandwidth o le faamama faʻamalosi e tatau ona i ai atoa i totonu o le fluorophore faʻalavelave faʻafefe e pei o le ogatotonu o le galu (CWL) o le faamama e latalata i le maualuga o le galu o le fluorophore. O le fa'amama fa'aoso opitika density (OD) fa'atonuina le pogisa o ata i tua; Ole OD ole fua ole lelei ole fa'amama e poloka ai le umi ole galu i fafo atu ole laina fa'asalalau po'o le bandwidth. Ole la'ititi ole OD ole 3.0 e fautuaina ae ole ole OD ole 6.0 pe sili atu e lelei.
Filifiliga Fa'asu
Fa'amama fa'amama e fa'atino le fa'amoemoe e fa'ataga ai le fluorescence mana'omia mai le fa'ata'ita'iga e o'o atu i le mea e iloa ai. Latou te poloka umi galu pupuu ma e maualuga le felauaiga mo galu uumi. O le ituaiga faamama e fesoʻotaʻi foi ma se numera, faʻataʻitaʻiga BA510IF i le ata (faʻalavelave faʻalavelave faʻafefe), o lena faʻailoga e faʻatatau i le umi o le galu i le 50% o lona maualuga faʻasalalau.
O fautuaga lava e tasi mo filiga faʻamalosi e faʻamaoni mo faʻamaʻi faʻamalo: laʻititi faʻasalalau, bandwidth, OD, ma CWL. O se fa'amama fa'amama fa'atasi ai ma le CWL lelei, fa'asalalauga la'ititi, ma le tu'ufa'atasiga o le OD e maua ai ata sili ona susulu, fa'atasi ai ma le poloka sili ona loloto e mafai, ma fa'amautinoa le iloa o fa'ailo fa'alilolilo vaivai.
Dichroic Mirror
O le fa'ata dichroic o lo'o tu'uina i le va o le fa'amama fa'aoso ma le fa'amama fa'amama i le 45 ° angle ma fa'aalia le fa'ailo fa'aoso aga'i atu i le fluorophore a'o tu'uina atu le fa'ailo fa'amalo aga'i i le va'aiga. O filiga sili ona lelei dichroic ma beam splitters o loʻo i ai suiga mataʻutia i le va o le maualuga o le ata ma le maualuga o le felauaiga, faatasi ai ma le> 95% ata mo le bandwidth o le faamama faʻafefe ma se faʻasalalauga o le> 90% mo le bandwidth o le faʻamama faʻamalo. Filifili le faamama o lo'o mafaufau i le umi o le galu (λ) o le fluorophore, e fa'aitiitia ai le malamalama se'ese ma fa'ateleina le fua fa'atusa o fa'ailo-i-pi'o.
O le fa'ata dichroic i lenei ata o le DM505, ua fa'aigoaina ona o le 505 nanometers o le galu i le 50% o le maualuga o le fa'asalalauga mo lenei fa'ata. O le faʻaogaina o le faʻataʻitaʻiga mo lenei faʻata o loʻo faʻaalia ai le maualuga o le faʻasalalauga i luga aʻe o le 505 nm, o se pa'ū maualuga i le agavale o le 505 nanometers, ma le maualuga o le faʻaalia i le agavale o le 505 nanometers ae o loʻo i ai pea nisi faʻasalalauga i lalo ole 505 nm.
O le a le eseesega i le va o le pasi umi ma le fa'aili fa'aili?
E mafai ona vaevaeina filiga fluorescence i ni ituaiga se lua: pasi umi (LP) ma pasi pasi (BP).
O fa'amama pasi uumi e fa'asalalau atu galu uumi ma poloka ai mea pupuu. O le umi o le galu tipi o le tau i le 50% o le maualuga o le felauaiga, ma o galu uma i luga aʻe o le tipi o loʻo faʻasalalauina e ala i le pasi umi. E masani ona fa'aaogaina i fa'ata fa'a-dichroic ma fa'amama fa'amama. E tatau ona fa'aoga filiga Longpass pe a mana'omia e le talosaga le aofa'i maualuga o le fa'aoso ma pe a le mana'omia pe le talafeagai le fa'ailoga tagata, lea e masani lava mo su'esu'ega e fa'atupuina ai se ituaiga e tasi e fa'aosoina i fa'ata'ita'iga e fai si maualalo le maualuga o le fa'amalama i tua.
Fa'amama pasi fa'aili na'o le fa'auluina o se pa'u umi galu, ma poloka isi. Latou te faʻaitiitia le faʻasalalauga e ala i le faʻatagaina naʻo le vaega sili ona malosi o le fusi o le fluorophore e faʻasalalauina, faʻaitiitia le pisa o le autofluorescence ma faʻaleleia ai le faʻasologa o faailo-i-leo i faʻataʻitaʻiga autofluorescence maualuga, lea e le mafai ona ofoina atu e filiga umi.
E fia ituaiga o fa'amulumulu seti seti e mafai e BestScope ona tu'uina atu?
O nisi ituaiga masani o faamama e aofia ai le lanumoana, lanumeamata, ma le ultraviolet. E pei ona faaalia i le laulau.
| Filifili Seti | Filifiliga Fiafia | Dichroic Mirror | Filifiliga Papuipui | Lamepa LED Galu Umi | Fa'aaogāga |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | ·FITC: auala fa'ama'i fa'ama'i · moli moli: DNA, RNA ·Auramine: Tubercle bacillus ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | ·Rhodamine, TRITC: Metotia faʻamaʻi faʻamaʻi · Propidium iodide: DNA ·RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | · Mata'ituina le fa'alelei otometi ·DAPI: fa'ailoga DNA · Hoechest 332528, 33342: fa'aoga mo le valiina o Chromosome |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | · Catecholamines · 5-hydroxy tryptamine · Tetracycline: Auivi, Nifo |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | · Cy5 ·Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
O seti fa'aoga o lo'o fa'aaogaina i le mauaina o le fluorescence ua mamanuina i le tele o galu o lo'o fa'aaogaina i fa'aoga fa'aoga, lea e fa'avae i luga ole fa'aogaina ole fluorophores. Mo lenei mafuaʻaga, e faʻaigoaina foi i latou i le fluorophore latou te faʻamoemoeina mo ata, e pei o le DAPI (lanu moana), FITC (lanu meamata) poʻo le TRITC (lanu mumu) faʻamaʻi pusa.
| Filifili Seti | Filifiliga Fiafia | Dichroic Mirror | Filifiliga Papuipui | Lamepa LED Galu Umi |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
| Texas Red | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
E fa'afefea ona e filifilia se faamama fa'amalama?
1. O le mataupu faavae o le filifilia o le faamamaina o le fluorescence o le tuʻuina atu lea o le moli faʻamalama / faʻamalama e pasi atu i le faʻataʻitaʻiga i le mamao e mafai ai, ma poloka atoa le moli faʻamalosi i le taimi lava e tasi, ina ia maua ai le maualuga maualuga o le faʻailoga-i le pisa. Aemaise lava mo le faʻaaogaina o le telephoton excitation ma le aofaʻi o le microscope o mafaufauga i totonu, o le leo vaivai o le a mafua ai foi le faʻalavelave tele i le faʻaogaina o ata, o lea e maualuga atu ai le manaʻoga mo le faʻailoga i le pisa.
2. Iloa le fa'afiafiaina ma le fa'aosoina o alaleo o le fluorophore. O le fausiaina o se seti faamama felafolafoa'i e maua ai se ata maualuga, maualuga-fa'afeagai ma se lanu uliuli, fa'afiafiaga ma fa'amama fa'amama e tatau ona ausia le maualuga o le felauaiga fa'atasi ai ma le la'ititi o le passband ripple i luga o itulagi e fetaui ma le fluorophore excitation peaks poʻo le faʻafefe.
3. Mafaufau i le umi o filiga fluorescence. O nei fa'amama e tatau ona le mafai ona fa'ao'o mai le malosi o le malamalama e maua mai ai le malamalama ultraviolet (UV) e mafai ona o'o atu ai i le "mu", ae maise o le fa'amama fa'aoso a'o a'afia i le malosi atoa o le puna fa'amalamalamaga.
O Fa'ata'ita'i Fa'ata'ita'i Fa'alili Eseese
O punaoa o loʻo aoina ma faʻatulagaina i luga ole Initaneti, ma e faʻaaogaina mo le aʻoaʻoina ma fesoʻotaʻiga. Afai e iai se soliga, fa'amolemole fa'afeso'ota'i matou e tape.
Taimi meli: Tes-09-2022